دانلود پایان نامه ارشد:بررسی آلودگی فاژهای لاکتوباسیل‌های بومی جدا شده از نمونه‌های لبنی ایران

متن کامل پایان نامه مقطع کارشناسی ارشد رشته :زیست شناسی

عنوان : بررسی آلودگی فاژهای لاکتوباسیل‌های بومی جدا شده از  نمونه‌های  لبنی ایران

دانشگاه آزاد اسلامی

واحد علوم داروئی

دانشکده علوم و فناوری‌های نوین، گروه زیست شناسی

پایان نامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد(( M.SC))

 

عنوان:

بررسی آلودگی فاژهای لاکتوباسیل‌های بومی جدا شده از  نمونه‌های  لبنی ایران

 

استاد راهنما:

جناب آقای دکتر سید سعید میردامادی

 

اساتید مشاور:

سرکار خانم دکتر فرزانه عزیز محسنی

سر کار خانم مهندس فاطمه باقری

  

  سال تحصیلی: 93-1392

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمی شود(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                          صفحهخلاصه فارسی .....................................................................................................................................................    1مقدمه            ......................................................................................................................................................     2فصل اول:کلیات1-1-1- بیان مسئله ...........................................................................................................................................................    51-1-2-ضرورت های خاص .................................................................................................................................................. 71-1-3-اهداف عملی و کاربردی .........................................................................................................................................  71-1-4-پرسش های اصلی تحقیق ....................................................................................................................................   71-1-5-فرضیه ها ..................................................................................................................................................................... 81-2- غذاهای تخمیری و تاریخچه بشریت.......................................................................................................................  81-2-1- خصوصیات غذاهای تخمیری..............................................................................................................................   91-2-1-1- نگه داری...........................................................................................................................................................   101-2-1-2- تغذیه..................................................................................................................................................................   101-2-1-3- عملکرد...............................................................................................................................................................  101-2-1-4- خواص ارگانولپتیکی......................................................................................................................................    111-2-1-5- منحصر به فرد بودن......................................................................................................................................    111-2-1-6- ارزش اقتصادی...............................................................................................................................................    111-3- باکتری های لاکتیکی ...........................................................................................................................................    111-3-1- نقش باکتری های اسید لاکتیک در صنایع غذایی ...................................................................................    131-3-2- متابولیسم باکتری های اسید لاکتیک .........................................................................................................    141-3-2-1- باکتری های اسید لاکتیک هموفرمنتاتیو (همگن)...............................................................................    141-3-2-2- باکتری های اسید لاکتیک هتروفرمنتاتیو (ناهمگن)...........................................................................   15  1-4- لاکتوباسیل ها............................................................................................................................................................  171-5- طبقه بندی لاکتوباسیل ها......................................................................................................................................  181-6- تاریخچه ی لاکتوباسیل ها .....................................................................................................................................  191-7- محصولات . .................................................................................................................................................................  201-7-1- پنیر ........................................................................................................................................................................  201-7-1-1- انواع پنیر .........................................................................................................................................................  201-7-1-2- ارزش غذایی پنیر...........................................................................................................................................   201-7-2- ماست ...................................................................................................................................................................   211-8- باکتریوفاژ ..................................................................................................................................................................   221-8-1- نقش باکتریوفاژ در صنایع لبنی شیر ............................................................................................................   241-8-1-2- منابع اصلی آلودگی فاژی در کارخانجات صنایع لبنی .........................................................................  241-8-3- اثر باکتریوفاژها ...................................................................................................................................................  241-8-4- تاریخچه کشف باکتریوفاژ ...............................................................................................................................  251-8-5- مورفولوژی باکتریوفاژ ها ................................................................................................................................. 261-8-6- طبقه بندی باکتریوفاژ ......................................................................................................................................  281-8-7- مراحل ورود و تکثیر باکتریوفاژ ......................................................................................................................  301-8-7-1- مرحله جذب فاژ بر روی سلول باکتری ...................................................................................................  301-8-7-2- مرحله ورود فاژ به داخل باکتری ..............................................................................................................  311-8-7-3- بیوسنتز ..........................................................................................................................................................  311-8-7-4- رسیدگی کامل .............................................................................................................................................  311-8-8- منشا فاژ ..............................................................................................................................................................  321-8-9- سیکل حیاتی فاژ ..............................................................................................................................................  321-8-9-1- سیکل لیتیک    .........................................................................................................................................  321-8-9-2- سیکل لیزوژنیک ..........................................................................................................................................  321-8-10- روش جداسازی فاژ .......................................................................................................................................  341-8-10-1- روش مستقیم ...........................................................................................................................................  341-8-10-1-1-روش های میکروبیولوژی ...................................................................................................................  341-8-10-1-2- روش مولکولی .....................................................................................................................................  341-8-10-2 روش غیر مستقیم سنتی .........................................................................................................................  351-8-10-2-1- تست فعالیت .......................................................................................................................................  351-8-10-2-2- تست اندیکاتور ...................................................................................................................................  351-8-10-2-3- فلوسایتومتری ....................................................................................................................................  351-8-10-2-4- امپدانس الکتریکی یا رسانایی شیر ...............................................................................................  351-8-10-2-5- سنجش پلاک - لکه و رشد - توربیدومتری ...............................................................................  361-8-10-2-6- انواع PCR  ….......................................................................................................................................  371-8-10-2-6-1- …..Mutiplex PCR......................................................................................................................  371-8-10-2-6-2- Quntitive PCR…......................................................................................................................  371-8-10-2-6-3- Traditional PCR  …….............................................................................................................  381-8-11- کنترل فاژ .......................................................................................................................................................  381-9- مقاومت انتی بیوتیک ...........................................................................................................................................  401-9-1- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل های پروبیوتیک ................................................................................  421-9-2- انواع مقاومت  آنتی بیوتیک ..........................................................................................................................  431-9-3- انتقال ژن های افقی لاکتوباسیل های پروبیوتیک ................................................................................... 431-9-4- عوام ضد باکتریایی............................................................................................................................................ 431-9-4-1- آنتی بیوتیک ها............................................................................................................................................ 451-9-5- مکانیسم آنتی بیوتیک ها ..............................................................................................................................  451-9-5-1- آنتی بیوتیک ها ی ممانعت کننده از سنتز دیواره سلول..................................................................   471-9-5-1-1- آنتی بیوتیک های بتالاکتام ...............................................................................................................  481-9-5-2- مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک بتالاکتام .............................................................................................  481-9-5-2-1- پنی سیلین ها ......................................................................................................................................  491-9-5-2-2- سفالوسپورین ها و سفامایسین ها .....................................................................................................  501-9-5-2-3- گلیکوپپتیدها .........................................................................................................................................  511-9-5-2-4- پلی پپتید ها .........................................................................................................................................  511-9-5-2-5- ایزونیازید، اتیونامید، اتامبتول و سیکلوسرین ................................................................................. 521-9-5-3- انتی بیوتیک های مهار کننده سنتز پروتئین ...................................................................................... 521-9-5-3-1- آمینوگلیکوزید ها .................................................................................................................................  521-9-5-3-2- تتراسایکلین ........................................................................................................................................   541-9-5-3-2-1- مقاومت به تتراسایکلین ...............................................................................................................   541-9-5-3-3- اگزازولیدین .........................................................................................................................................   541-9-5-3-4- کلرامفنیکل ..........................................................................................................................................  551-9-5-3-5- ماکرولیدها ............................................................................................................................................  551-9-5-3-5-1- مقاومت به ماکرولید ها ................................................................................................................  551-9-3-6- کلیندامایسین ........................................................................................................................................... 561-9-3-7- استرپتوگرامین .......................................................................................................................................  561-9-5-4- آنتی بیوتیک های مهار کننده اسید نوکلوئیک .................................................................................. 571-9-5-4-1- کینولون ها ...........................................................................................................................................  571-9-5-4-2- ریفامپین و ریفابوتین .......................................................................................................................   571-9-5-4-3- مترانیدازول .........................................................................................................................................   581-9-5-4-4- آنتی متابولیت ها ................................................................................................................................  581-9-6-1- اهمیت مقاومت آنتی بیوتیک ها در دام .............................................................................................  59فصل دوم: مروری بر متون گذشته2-1- تاریخچه ..............................................................................................................................................................  622-2- مطالعات انجام شده در باکتریوفاژ .................................................................................................................  622-3- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها ..........................................................................................................  64فصل سوم: مواد و روش کار 3-1- دستگاه های مورد نیاز ......................................................................................................................................  683-2- لوازم مورد نیاز .....................................................................................................................................................  693-3- مواد مورد نیاز .......................................................................................................................................................  693-4- سویه های میکروبی مورد مطالعه ..................................................................................................................... 713-4-2- آماده سازی محیط های کشت ....................................................................................................................  713-4-2-1- محیط های کشت MRS  آگار ..............................................................................................................  723-4-2-2- محیط های کشت نرم MRS  آگار ......................................................................................................  723-4-2-3- محیط کشت MRS  مایع ......................................................................................................................  723-5- کشت و آزمایشات تعین هویت باکتری  ........................................................................................................  723-6- سنجش فاژ ...........................................................................................................................................................  733-6-1- روش دو لایه ای پلاک .................................................................................................................................  733-6-2- مشاهده پلاک توسط القاء با پرتو UV ....................................................................................................  733-6-3- آزمون Heap and Lawrence ...............................................................................................................  743-7- سنجش حساسیت نسبت به آنتی بیوتیک ...................................................................................................  753-7-2- آزمایش تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی به روش انتشار دیسک در آگار ( دیسک دیفیوژن) .....  763-7-2-1- روش انجام آزمایش دیسک گذاری ...................................................................................................   763-7-2-1-1- تهیه محیط کشت ...........................................................................................................................   763-7-2-1-2- روش کار ............................................................................................................................................  77فصل چهارم : نتایج 4-1- شرح مختصری از مطالعه ...............................................................................................................................  804-2- نتایج ....................................................................................................................................................................  804-2-1- نتایج حضور یا عدم حضور فاژ در سویه ها .............................................................................................  814-2-2- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء  UV و میتومایسین C  .................................................  834-2-3- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با میتومایسین C و Heap and Lawrence  .............. 834-2-4- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با پرتو UV و Heap and Lawrence ........................  844-3- نتایج حساسیت ومقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها ............................................................................ 844-4- نتایج میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه ها به آنتی بیوتیک .........................................................  914-5-1- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به آمینوگلیکوزید ها   924-5-2- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سفالوسپورین ها ..  924-5-3- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به گلیکوپپتیدها .......  934-5-4- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به لینکوزامید ها .......  934-5-5- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به ماکرولیدها ............  944-5-6- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به پنی سیلین ها .....  944-5-7- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به کینولون ها ...........  954-5-8- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سولفانامید ها .........  954-5-9- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به تتراسایکلین ها........ 964-5-10- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به دیگر آنتی بیوتیک‌ها..................  96فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری  5-1- اهمیت جداسازی فاژ ........................................................................................................................................   995-2- نتایج جستجو برای جداسازی فاژ ..................................................................................................................  1005-3- اهمیت الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی پروبیوتیک ها ..............................................................................  1025-4- راه های انتقال ژن های مقاومت به آنتی بیوتیکی در لاکتوباسیل ها ....................................................  1035-5- نتایج تفسیر برای الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی ....................................................................................   1045-6- پیشنهادات ..........................................................................................................................................................  109منابع...............................................................................................................................................................................  111ضمائم پوسترهای ارائه شده در پانزدهمین کنگره بین المللی  میکروب شناسی ایران ............................................. 121خلاصه انگلیسی .......................................................................................................................................................... 12۳فهرست جداولجدول 1-1- مورفولوژی باکتریوفاژهای اسید لاکتیک ..........................................................................................  30جدول 1-2- گروه های آنتی بیوتیکی و مکانیسم عمل آن ها ............................................................................  46جدول 1-3- پنی سیلین ها و طیف اثر آن ها ........................................................................................................  49جدول 1-4- مثال های انتخابی از سفالوپورین ها و سفامایسین و طیف اثر آن ها ........................................  50جدول 1-5- ماکرولیدها وتتراساسکلین ...................................................................................................................  56جدول1-6- کینولون ها ..............................................................................................................................................   57جدول 3-1- دستگاه های مورد استفاده در تحقیق به همراه مدل آن ها .......................................................  68جدول 3-2- مواد مورد نیاز در آزماشی به همراه کشور سازنده آن ها .............................................................  70جدول 3-3- دیسک های آنتی بیوتیک مورد استفاده جهت آنتی بیوگرام در این مطالعه .........................   75جدول 4-1- نتایج حضور یا فقدان فاژ در سویه ها با استفاده از 3 روش مختلف .........................................  81جدول 4-2- نتایج قطر هاله عدم رشد و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی برای سویه های لاکتوباسیل بومی..........  85جدول 4-3- میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه های به آنتی بیوتیک ..................................................  91فهرست شکل هاشکل 1-1- روش تخمیر همولاکتیکی در باکتری های اسید لاکتیک .............................................................. 16شکل 1-2- تخمیر هترولاکتیکی باکتری های اسید لاکتیک ............................................................................  17شکل 1-3- شمای کلی باکتریوفاژ ...........................................................................................................................  23شکل 1-4- سیکل حیاتی لیتیک و لیزوژنیک باکتریوفاژ ....................................................................................  33شکل 3-1- پلاک .......................................................................................................................................................   74شکل 3-2- اندازه گیری هاله عدم رشد ................................................................................................................  78فهرست نمودارها4-1- نمودار نتایج مقایسه 3 روش مختلف برای جداسازی فاژ .......................................................................  834-2-1- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به آمینوگلیکوزیدها .......... 924-2-2- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به سفالوسپورین ها..........  924-2-3- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به ونکومایسین ...............   934-2-4- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کلیندامایسین.............   934-2-5- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به اریترومایسین.............    944-2-6- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به پنی سیلین ها ............  944-2-7- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کینولون ها......................954-2-8- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کوتریماکسازول ..........  954-2-9- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به تتراسایکلین ...............  964-2-10- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کلرامفنیکل و نیتروفورانتوئین............    964-2-11- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به میتومایسین...........  97 خلاصه فارسی:امروزه با افزایش جمعیت و شرایط حاکم بر زندگی شهری، نیاز به تولید غذاها و محصولات فرآوری شده تخمیری از جمله ماست و پنیر افزایش چشمگیری پیدا کرده است.  تولید روزافزون محصولات لبنی تخمیری  از یک سو و معضل فاژزدگی در این فرآورده ها از سویی دیگر، یک نیروی پیش برنده، برای بسیاری از تحقیقات بر روی کشت های آغازگر است. مهمترین باکتری های استفاده شده به عنوان ارگانیسم های آغازگر باکتری های اسید لاکتیک هستند.باکتریوفاژها یا به اختصار فاژها، ویروس هایی هستند که به باکتری ها حمله می کنند وآنها را از بین برده، باعث کاهش یا عدم فعالیت آغازگرها می شوند. این ویروس ها مختص باکتریها هستند و تاثیر آنها بستگی به نوع فاژ، تراکم و سرعت رشد باکتریای ها دارد. آسیب کشت آغازگر توسط باکتریوفاژ می تواند باعث انجام فرایند  تخمیر با سرعت پایین و گاهی باعث شکست تخمیر شود. که در نهایت آسیب به وسیله ی فاژ باعث طولانی شدن زمان تولید و کیفیت پایین محصول نیز خواهد شد.  لذا در این راستا  آلودگی فاژ  65 سویه ی بومی لاکتوباسیل و مقایسه ی حساسیت روش های مختلف مورد بررسی قرار گرفته است  همچنین حساسیت آنتی بیوتیکی این سویه ها نسبت به 23 گروه آنتی بیوتیک مختلف مورد مطالعه قرار گرفته است. این باکتری ها که تحت عنوان آغازگر در صنعت لبنی استفاده می شوند به عنوان پروبیوتیک نیز بدلیل اثرات سلامت بخششان  استفاده می شوند پروبیوتیک ها نباید با انتقال ژن های مقاومت آنتی بیوتیکی به باکتری های دیگر باعث مقاوم شدن آنها به آنتی بیوتیک شوند. بنابراین بررسی میزان مقاومت آن ها به داروهای ضد میکروبی قبل از ورود به صنعت از اهمیت بسیار بالایی برخوردار است.برای جداسازی فاژ از سویه های بومی لاکتوباسیل از روش دو لایه ای پلاک و روش هیپ و لورنس[1]  استفاده شد و برای بررسی  حساسیت آنتی بیوتیکی گونه های لاکتوباسیل بومی، نسبت به 23 گروه آنتی بیوتیک مختلف از روش  انتشار در اگار بوسیله دیسک  استفاده  شد.با استفاده از روش دو لایه ای پلاک 76% سویه ها، با القا سویه های لیزوژنیک توسط اشعه ماورا بنفش 38/15% سویه ها و با استفاده از روش هیپ و لورنس 52% سویه ها آلوده به فاژ هستند. نتایج نشان می دهد با استفاده از روش دیسک دیفیوژن تمامی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کینولون ها ها(نالیدیکسیک اسید و آفلوکساسین) مقاومت 100 درصد دارند و به آمینوگلیکوزید ها (کانامایسین و توبرامایسین) بیشترین میزان مقاومت را دارند و در نقطه ی مقابل بیشترین میزان حساسیت  سویه های لاکتوباسیل مربوط به گروه پنی سیلین ها (آمپی سیلین) می باشد و نسبت به آنتی بیوتیک های مورد مطالعه ی دیگر رفتار متفاوتی را از خود نشان دادند.کلمات کلیدی: لاکتوباسیل ها، باکتریوفاژ، آنتی بیوتیک، مقاومت، پروبیوتیک1-1-مقدمه:پروبیوتیک ها میکروارگانیسم هایی هستند که اگر به میزان کافی استفاده شوند دارای اثرات سود بخش برای سلامت انسان هستند. گونه های میکروبی زیادی دارای خصوصیات پروبیوتیکی هستند که لاکتوباسیل ها غالب گونه ها را به خود اختصاص می دهد. لاکتوباسیل ها دارای تاریخچه ای بس طولانی در تولید غذاهای تخمیری و آشامیدنی ها هستند.پروبیوتیک ها به طور وسیع به عنوان سویه های آغازگر برای ساخت پنیر، ماست، خمیر ترش و دیگر محصولات غذایی تخمیری به کار می روند. نقش باکتری های اسید لاکتیک( به خصوص لاکتوباسیل ها) بدین صورت است: این باکتری ها در روده کلونیزه شده و باعث تحریک تولید ایمنوگلوبولین می شوند، سبب بیان اینترفرون ها در ماکروفاژ می شوند، موجب اسیدیفیکاسیون محیط شده و پر اکسید هیدروژن را تولید می کنند،کاهش اثر ترکیبات سرطان زا،  تولید باکتریوسین و جلوگیری از چسبیدن باکتری های پاتوژن مانند سالمونلا تیفی موریوم و نایسریا گونوره آ به سلول های اپتلیال از دیگر وظایف این باکتری هاست.(7) استفاده از پروبیوتیک ها نه فقط در انسان بلکه در غذای طیور و دام در صنایع غذایی به فراوانی مورد استفاده قرار می گیرند.(11)آلودگی این سویه ها با باکتریوفاژ یک مشکل رایج در همه صنایعی است که از این میکروارگانیسم ها استفاده می کنند. از دست رفتن هزینه های هنگفت از مشکلات عدیده ای است که کارخانجات لبنی را تحدید می کند. مشکل آلودگی به فاژها در کارخانجات لبنی توسط روش های مختلف قابل کنترل است که استفاده از سویه های مقاوم به فاژ و مخلوط سویه های استارتر کالچر از جمله روش های کنترل فاژ است.(20) علاوه بر این ها برنامه های سخت گیرانه ی بهداشتی و محیط های کشت اختصاصی برای کارخانه های لبنی نیز وجود دارد. حضور باکتریوفاژها در همه جا و با تیترهای مختلف وجود دارد. روش پایه ای PCR روشی سریع برای شناسایی و تعیین باکتریوفاژ در استارتر کالچر ها است و به عنوان کنترل روتین باکتریوفاژ در صنایع لبنی به کار می رود گرچه روش های میکروبیولوژی مانند سنجش پلاک دارای استاندارد طلایی برای جداسازی فاژ است بدلیل اینکه این روش، روشی کمی و کیفی است. (60)مقاومت به آنتی بیوتیک در پروبیوتیک ها بسیار حائز اهمیت است. پروبیوتیک ها قبل از وارد شدن به عرصه ی صنعت غذایی از لحاظ مقاوم بودن به داروهای ضد میکروبی باید مورد بررسی قرار گیرند. بسیاری از باکتری ها با کسب پلاسمید به آنتی بیوتیک مقاوم می شوند گرچه به نظر می رسد مقاومت به بعضی داروها مانند نالیدیکسیک اسید توسط پلاسمید کد نمی شود (در این مورد مقاومت  معمولا به وسیله جهش در ژن هایی که برای پروتئین هدف کد می شود، صورت می گیرد). باکتری ها می توانند یا با کسب چندین پلاسمید مستقل یا یک پلاسمید حاوی چندین ژن مقاومت به چند آنتی بیوتیک مجزا مقاوم شوند. ترانسپوزون ها نقش مهمی در گسترش مقاومت به آنتی بیوتیک در پلاسمیدها دارند. به این صورت که ترانسپوزون ها حرکت ژن های مقاوم به آنتی بیوتیک را بین پلاسمید های مختلف یا از کروموزوم یک باکتری که به طور طبیعی مقاوم به آنتی بیوتیک می باشد به پلاسمید، تقویت می کند.تعداد صفحه : 164قیمت : 14000تومان

بلافاصله پس از پرداخت ، لینک دانلود پایان نامه به شما نشان داده می شود

و در ضمن فایل خریداری شده به ایمیل شما ارسال می شود.

پشتیبانی سایت :        09309714541 (فقط پیامک)        info@arshadha.ir

در صورتی که مشکلی با پرداخت آنلاین دارید می توانید مبلغ مورد نظر برای هر فایل را کارت به کارت کرده و فایل درخواستی و اطلاعات واریز را به ایمیل ما ارسال کنید تا فایل را از طریق ایمیل دریافت کنید.

--  -- --

مطالب مشابه را هم ببینید

فایل مورد نظر خودتان را پیدا نکردید ؟ نگران نباشید . این صفحه را نبندید ! سایت ما حاوی حجم عظیمی از پایان نامه های دانشگاهی است. مطالب مشابه را هم ببینید. برای یافتن فایل مورد نظر کافیست از قسمت جستجو استفاده کنید. یا از منوی بالای سایت رشته مورد نظر خود را انتخاب کنید و همه فایل های رشته خودتان را ببینید