دانلود پایان نامه ارشد: مطالعه­ ی ساختار، فعالیت چاپرونی و آلرژی­زایی کازئین­بتای قندی و غیرقندی

متن کامل پایان نامه مقطع کارشناسی ارشد رشته : زیست شناسی

گرایش : علوم سلولی و مولکولی

عنوان : مطالعه­ ی ساختار، فعالیت چاپرونی و آلرژی­زایی کازئین­بتای قندی و غیرقندی

دانشکده علوم

پایان نامه کارشناسی ارشد در رشته­ ی

زیست­ شناسی- علوم سلولی و مولکولی

مطالعه ­ی ساختار، فعالیت چاپرونی و آلرژی­زایی کازئین­بتای قندی و غیرقندی

 استاد راهنما

دکتر رضا یوسفی

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمی شود(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)چکیدهکازئین­ها فسفوپروتئین­هایی هستند که 80 درصد پروتئین­های شیرگاو را تشکیل می­دهند. این پروتئین­ها  شامل انواع مختلف نظیرαS1 ، αS2، β و κ می­باشند.  اگرچه آلرژی­زایی این پروتئین­ها امروزه یکی از چالش های بزرگ علم پزشکی است، اما آن­ها به عنوان منبع غنی پپتیدهای فعال زیستی با فعالیت­های مختلف از جمله خاصیت آنتی­اکسیدانی و فعالیت ضد فشار خون می­باشند. در این پژوهش کازئین­بتا با استفاده از ستون کروماتوگرافی تعویض یونی دی اتیل دی آمینواتیل-سلولز خالص شد. سپس کل کازئین­های شیرگاو و کازئین بتا به روش غیرآنزیمی و در شرایط احیایی قندی شد. نتایج آزمون جذبی اُ-فتالدئید و نشری فلورسامین حاکی از درصد بالای قندی شدن این پروتئین­ها در روش احیایی بود. مطالعه­ی ساختاری کازئین­بتا با استفاده از دستگاه فلورسانس و دستگاه دورنگ­نمایی دورانی بیانگر تغییرات قابل توجه ساختار این پروتئین ضمن فرآیند قندی شدن غیرآنزیمی بود. از منظر فعالیت چاپرونی دو کازئین­بتای قندی و غیرقندی تفاوت قابل ملاحظه­ای را نشان دادند. در این مطالعه پس از هضم ناقص این پروتئین­ها با دو آنزیم تریپسین و کیموتریپسین، خواص آنتی اکسیدانی، توانایی مهار آنزیم ACE و فعالیت آلرژی­زایی آن­ها و پپتید­های حاصل از هضم­شان بررسی شد. نتایج این پژوهش پیشنهاد می­کند که در تمام موارد هم با قندی شدن هم طی هضم ناقص کازئین­ها فعالیت آنتی­اکسیدانی این پروتئین­ها تا حدودی بهبود می­یابد. نتایج این پژوهش پیشنهاد می­کند که خاصیت آلرژی­زایی کازئین­بتا بعد از قندی شدن و هضم آنزیمی با آنزیم­های فوق­الذکر به طور معنا داری تغییر نمی کند. همچنین نتایج این پژوهش نشان داد که فعالیت آلرژی­زایی تنها کازئین­های شیرگاو که با قند لاکتوز قندی شده بودند ضمن هضم ناقص با آنزیم کیموتریپسین کاهش می­یابد. همچنین مطالعه­ی فعالیت مهاری آنزیم ACE پیشنهاد می­کند که کازئین­بتای غیرقندی و محصولات پپتیدی حاصل از هضم آنزیمی ناقص آن نسبت به پروتئین­های قندی و محصولات هضم ناقص آنزیمی آن­ها خاصیت مهار آنزیم ACE بیشتری را دارد. در مجموع به منظور دستیابی محصولات هضمی کازئینی با توان آلرژی­زایی کمتر و خواص زیستی ارتقا یافته به مطالعات بیشتری همراه با تغییر شرایط آزمایشگاهی نظیر تغییر زمان هضم و یا تغییر نسبت پروتئاز به سوبسترای کازئینی ضروری به نظر می­آید.واژگان کلیدی: ساختار کازئین­بتا، فعالیت چاپرونی، فعالیت مهار آنزیم ACE، فعالیت آنتی­اکسیدانی، آلرژی­زای.فهرست مطالبعنوان                                                                                                                      صفحهفصل اول: مقدمه1-1- شیر....................................................................................................................... 21-2- ترکیبات شیر................................................................................................................................. 41-3- پروتئین­های شیر......................................................................................................................... 51-3-1- پروتئین­های آب پنیر...................................................................................................... 61-3-2- کازئین­ها............................................................................................................................. 71-3-3- کازئین­بتا............................................................................................................................. 91-4- فعالیت­های زیستی کازئین­ها.................................................................................................. 111-4-1- فعالیت چاپرون کازئین­های شیر................................................................................ 111-4-2- پپتیدهای فعال زیستی................................................................................................. 121-4-2-1- پپتیدهای فعال زیستی..................................................................................... 121-4-2-2- منابع اصلی پپتیدهای فعال زیستی.............................................................. 121-4-2-3- برخی از خواص پپتیدهای فعال زیستی..................................................... 121-4-2-3-1- خاصیت ضد فشار خون........................................................................ 121-4-2-3-2- فعالیت آنتی­اکسیدانی........................................................................... 141-5- مشکلات ناشی از مصرف شیر در افراد................................................................................ 151-5-1- عدم تحمل لاکتوز.......................................................................................................... 151-5-2- آلرژی به پروتئین­های شیر.......................................................................................... 16عنوان                                                                                                                      صفحه1-5-2-1- معرفی انواع آزمون­های رایج جهت مطالعه­ی فرآیند آلرژی.................. 181-5-2-2- آزمون الایزا.......................................................................................................... 191-6- قندی شدن غیرآنزیمی پروتئین­ها........................................................................................ 20فصل دوم: مروری بر پژوهش­های پیشین................................................................... 23فصل سوم: مواد و روش­های تحقیق3-1- مواد مصرفی................................................................................................ 273-2- تهیه­ی محلول­ها........................................................................................ 283-2-1- تهیه­ی محلول­های کازئینی، کازئین­بتا و تعیین غلظت آن­ها............................ 283-2-2- تهیه­ی محلول برادفورد و رسم نمودار استاندارد آن با استفاده از کازئین­بتا.................................................................................... 283-2-3- تهیه­ی محلول­های مورد نیاز برای الکتروفورز ژلی................................................ 303-2-3-1-تهیه محلول SDS 20 درصد........................................................................... 303-2-3-2- تهیه محلول آمونیوم پر سولفات (APS)...................................................... 303-2-3-3- تهیه محلول آکریلامید و بیس آکریلامید................................................... 313-2-3-4- تهیه بافر تریس 5/1 مولار.............................................................................. 313-2-3-5- تهیه بافر تریس 5/0 مولار.............................................................................. 313-2-3-6- تهیه بافر تانک به حجم 500 میلی­لیتر...................................................... 313-2-3-7- تهیه بافر نمونه X2........................................................................................... 323-2-3-8- تهیه 100 میلی­لیتر محلول کوماسی­بلو...................................................... 333-2-3-9- تهیه محلول رنگ بر ژل.................................................................................... 333-2-4- تهیه محلول OPA به حجم 50 میلی­لیتر............................................................. 333-2-5- تهیه محلول فلورسامین................................................................................................ 34عنوان                                                                                                                      صفحه3-2-6- تهیه محلول ANS......................................................................................................... 353-2-7-  تهیه محلول ABTS رادیکال..................................................................................... 363-2-8- تهیه عصاره­ی ACE از پودر استون شش خرگوش............................................. 373-3-روش­ها................................................................................. 383-3-1- تخلیص کازئین­بتا شیرگاو............................................................................................ 383-3-2- تخلیص هموگلوبین A از خون انسان...................................................................... 393-3-3- تعیین میزان خلوص پروتئین با استفاده از SDS-PAGE................................. 403-3-4- تهیه پودر استون شش خرگوش................................................................................ 403-3-5- قندی کردن کازئین­بتا و کازئین­های شیرگاو به روش غیرآنزیمی................... 413-3-6- آزمون­های OPA و فلورسامین برای تایید فرآیندقندی شدن غیرآنزیمی....................................................... 413-3-7- مطالعه­ی فلورسانس ذاتی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی......................... 423-3-8- مطالعه­ی فلورسانس عارضی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی.................... 433-3-9- مطالعه تغییرات ساختاری کازئین­های بتای قندی و غیرقندی،با استفاده از دستگاه دورنگ نمایی دورانی................................................................................ 433-3-10- مطالعه­ی فعالیت چاپرونی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی..................... 443-3-11- هضم کازئین­های شیرگاو و کازئین­بتای قندی و غیرقندیبه وسیله­ی آنزیم­های تریپسین و کیموتریپسین پانکراس گاوی........................................ 443-3-12- مطالعه­ی فعالیت آنتی­اکسیدانی کازئین­های شیرگاو کازئین­بتای قندی و غیرقندی.................................................................................... 453-3-13- مطالعه­ی فعالیت مهار آنزیم ACE به وسیله­ی کازئین­بتا قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آن­ها............................................. 473-3-14- مطالعه­ی توان آلرژی­زایی کازئین­ها و کازئین­بتای قندی و غیرقندی.................................................................................. 47عنوان                                                                                                                      صفحه3-3-15- آزمون آماری............................................................................. 48 فصل چهارم: نتایج و بحث4-1- مطالعه اثر قندی شدن غیرآنزیمی بر ساختار، فعالیت­های زیستی(چاپرونی، آنتی­اکسیدانی و مهار آنزیمACE ) و آلرژی­زایی کازئین­بتا..................................... 504-1-1- تخلیص پروتئین کازئین­بتا........................................................................................... 504-1-2- تخلیص هموگلوبینA از خون انسان........................................................................ 514-1-3- مطالعه فرآیند قندی شدن غیرآنزیمی کازئین­بتادر حضور ماده­ی احیا کننده.......................................................................................................... 524-1-3-1- مطالعه­ی قندی شدن کازئین­بتا با استفاده از ترکیب OPA.................. 534-1-3-2- مطالعه فرآیند قندی شدن غیرآنزیمی کازئین­بتا با استفاده از ترکیب فلورسامین................................................................................................................ 544-1-3-3- استفاده از ژل SDS-PAGE احیایی برای تایید فرآیندقندی شدن غیرآنزیمی کازئین­بتا.......................................................................................... 554-1-4- مطالعه­ی فلورسانس ذاتی و عارضی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی...... 564-1-5- مطالعه ساختار دوم کازئین­های بتای قندی و غیرقندی با استفادهاز دستگاه دورنگ نمایی دورانی.................................................................................................... 584-1-6- مطالعه فعالیت چاپرونی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی............................ 604-1-7- هضم آنزیمی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی با آنزیم­های تریپسین و کیموتریپسین............................................................................................................. 624-1-7-1- تایید فرآیند هضم آنزیمی با استفاده از ژلSDS-PAGE(15درصد) احیایی..................................................................................................................... 63عنوان                                                                                                                      صفحه4-1-7-2- مطالعه فعالیت آنتی­اکسیدان کازئین­های بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آن­ها.................................................................. 654-1-7-3- مطالعه خاصیت مهار آنزیم ACE به وسیله­ی کازئین­هایبتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آن­ها.............................. 714-1-8- مطالعه آلرژی­زایی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهایحاصل از هضم آنزیمی آن­ها......................................................................................................... 734-2- مطالعه اثر قندی شدن غیرآنزیمی بر ساختار، فعالیت آنتی­اکسیدانی و آلرژی­زایی کازئین­های شیرگاو....................................................................................................... 774-2-1- جداسازی و قندی کردن کازئین شیرگاو................................................................. 774-2-2- تایید فرآیند قندی شدن کازئین­های شیرگاو........................................................ 774-2-2-1- استفاده از ژل SDS-PAGE (12 درصد) برای تایید قندی شدن غیرآنزیمی........................................................................................................... 774-2-2-2- استفاده از ترکیب OPA برای مطالعه­ی قندی شدن غیرآنزیمیکازئین­های شیرگاو..................................................................................................................... 784-2-3- هضم آنزیمی کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو با آنزیم­های تریپسین و کیموتریپسین............................................................................................................. 804-2-4- مطالعه فعالیت آنتی­اکسیدان کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو و پپتیدهای حاصل از هضم آن­ها............................................................................................... 824-2-5- مطالعه آلرژی­زایی کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آن­ها به وسیله­ی دو آنزیم تریپسین و کیموتریپسین.............. 86عنوان                                                                                                                      صفحهخلاصه­ی نتایج ........................................................................................................................................... 90 نتیجه­ گیری نهایی..................................................................................................................................... 91فهرست منابع و مآخذ.............................................................................................................................. 92- شیرشیر یک مایع زیستی پیچیده متشکل از آب، پروتئین، چربی، کربوهیدرات، مواد معدنی و برخی ترکیبات فعال زیستی از جمله آنزیم­ها و ویتامین­ها می­باشد که به عنوان اولین ماده غذایی برای نوزاد، بوسیله غدد پستانی موجودات پستاندار ساخته می­شود. در اوایل دوران شیردهی، شیر آغوز[1] نامیده می­شود که سرشار از آنتی­بادی­هایی است که خطر ابتلای نوزاد به بسیاری از بیماری­ها را کاهش می­دهد. شیر به عنوان اولین ماده­ی غذایی برای نوزاد شامل اکثر ترکیبات ضروری و مورد نیاز برای رشد و نمو است. در شکل (1-1) ترکیبات اصلی موجود در شیر مشاهده می­شود (Pehrsson، 2000).شکل1-1- نمایی از ترکیبات موجود در شیر.شیر نه تنها به عنوان یک ماده­ی غذای برای تغذیه­ی نوزاد تازه متولد شده مطرح است بلکه به عنوان یک ماده­ی غذایی ارزشمند و مغذی برای انسان در تمام کشورهای جهان استفاده می شود. امروزه در سراسر جهان دامداری­های بزرگ در سطح وسیع به تولید شیر و محصولات لبنی مشغولند به طوریکه در سال 2011 میزان تولید شیر در جهان 730 میلیون تن بوده است. هندوستان به عنوان بزرگترین کشور تولید و مصرف کننده شیر در جهان و نیوزلند، 28کشور عضو اتحادیه اروپا، استرالیا و ایالات متحده­ی آمریکا به عنوان بزرگترین صادر کننده های شیر و محصولات لبنی می­باشند. همچنین چین و روسیه به عنوان بزرگترین واردکنندگان شیر و محصولات لبنی در جهان شناخته می­شوند (Blasko، 2011).1-2- ترکیبات شیرهمانطور که در بالا ذکر شد، شیر یک ماده­ی غذایی غنی از پروتئین، کربوهیدرات، چربی و ترکیبات معدنی است.  درصد، اندازه و نوع هر یک از ترکیبات تشکیل دهنده شیر بسته به گونه جاندار متفاوت است. به عنوان مثال درصد پروتئین شیر انسان نسبت به شیر گاو پایین­تراست در صورتی که درصد کربوهیدرات و چربی آن بالاتر می­باشد. شیر اسب و الاغ کمترین میزان چربی را در بین گونه­های مختلف دارد. همچنین شیر انسان فاقد پروتئین بتالاکتوگلوبولین[2] است، درصورتی که این پروتئین یکی از پروتئین­های اصلی آب پنیر است و به مقدار قابل ملاحظه­ایی در شیرگاو دیده می­شود. در جدول (1-1) درصد ترکیبات موجود در شیر برخی جانوران مشاهده می­شود (Nelson و همکاران 1951 ، Barlowska و همکاران 2011).جدول1-1- ترکیبات سازنده شیر جانوران مختلف بر حسب درصد.1-3- پروتئین­های شیراکثر پروتئین­های شیر در طول زمان شیردهی بوسیله­ی سلول­های پوششی غدد پستانی تولید و ترشح می­شود. این سلول­ها علاوه بر پروتئین، ترکیبات دیگری مانند چربی (تری­آسیل گلیسرول[3] و دی­گلیسرول[4]) و کربوهیدرات (لاکتوز[5]) را نیز تولید و ترشح می­کنند (Bouguyo و همکاران 2006، De Kruif و همکاران 2003).تعداد صفحه : 129قیمت : 14000تومان

بلافاصله پس از پرداخت ، لینک دانلود پایان نامه به شما نشان داده می شود

و در ضمن فایل خریداری شده به ایمیل شما ارسال می شود.

پشتیبانی سایت :        09309714541 (فقط پیامک)        info@arshadha.ir

در صورتی که مشکلی با پرداخت آنلاین دارید می توانید مبلغ مورد نظر برای هر فایل را کارت به کارت کرده و فایل درخواستی و اطلاعات واریز را به ایمیل ما ارسال کنید تا فایل را از طریق ایمیل دریافت کنید.

--  -- --

مطالب مشابه را هم ببینید

فایل مورد نظر خودتان را پیدا نکردید ؟ نگران نباشید . این صفحه را نبندید ! سایت ما حاوی حجم عظیمی از پایان نامه های دانشگاهی است. مطالب مشابه را هم ببینید. برای یافتن فایل مورد نظر کافیست از قسمت جستجو استفاده کنید. یا از منوی بالای سایت رشته مورد نظر خود را انتخاب کنید و همه فایل های رشته خودتان را ببینید